合同包

品目號(hào)

服務(wù)

名稱

規(guī)格/配置

數(shù)量

競(jìng)價(jià)最高限價(jià)（單價(jià)/元）

競(jìng)價(jià)最高限價(jià)（總價(jià)/元）

采購(gòu)單位

1

1

大鼠降血壓實(shí)驗(yàn)委托檢測(cè)

實(shí)驗(yàn) 1：
實(shí)驗(yàn)材料：大鼠SHR（買(mǎi)回時(shí)7周齡）24只、Wistar大鼠12只、樣品、卡托普利
實(shí)驗(yàn)分組： 實(shí)驗(yàn)分6組，每組6只。
1） SHR：對(duì)照組（ 0.9%生理鹽水）
2） SHR：卡托普利組（ 5 mg/kg BW）
3） SHR：樣品高劑量組（ 400mg/kg BW）
4） SHR：樣品低劑量組（ 100mg/kg BW）
5） Wistar 大鼠：對(duì)照組（ 0.9%生理鹽水）
6） Wistar 大鼠：樣品組（ 400mg/kg BW）
實(shí)驗(yàn)步驟：
    大鼠買(mǎi)回時(shí)為7周齡左右， 需飼養(yǎng)至12周齡用于實(shí)驗(yàn)。
    SHR 和Wistar大鼠各基于平均基礎(chǔ)血壓值進(jìn)行分組， 按上述分組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每日給藥一次，試驗(yàn)給藥周期30天。試驗(yàn)期間每5天固定時(shí)間，測(cè)定大鼠給藥前和給藥后2、4、6、8、10h的血壓、體重和心率值，每只大鼠血壓值為測(cè)定5次的平均值（血壓測(cè)定方法： 將待測(cè)大鼠放在 37℃恒溫盒中保持安靜10min，采用尾脈搏法測(cè)量大鼠的收縮壓（SBP）和心率（HR）五次，計(jì)算平均值，記錄血壓波段圖）。

試驗(yàn)期滿后，動(dòng)物禁食18 h，將動(dòng)物麻醉后，從腹主動(dòng)脈取血，一部分血樣加入抗凝管于4℃下10000 r/min離心20 min獲取血漿，另一部分血液加入非抗凝管于4℃下10000 r/min 離心20 min獲取血清。最后處死動(dòng)物，取腹大動(dòng)脈、肺組織、腎臟、心臟等組織，用預(yù)冷生理鹽水洗凈，濾紙吸干，稱重。組織存于-80℃待分析。同時(shí)分離收集胸部主動(dòng)脈，以及第二個(gè)腸系膜動(dòng)脈分支（直徑150~250μm，長(zhǎng)度~2mm），并盡快應(yīng)用于血管功能分析（見(jiàn)實(shí)驗(yàn)2）。

ELISA 檢測(cè)血漿中Ⅱ型血管緊張素（ AngⅡ）、緩激肽和 NO 含量；生化試劑盒檢測(cè)血清中總膽固醇(T-CHO)，甘油三酷(TG)、高密度脂蛋白 (HDL-G)、低密度脂蛋白(LDL-G)、血清中鉀、鈉含量；WB 檢測(cè)大動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈混合樣品中 ICAM-1、VCAM-1、 eNOS 的表達(dá)（ WB 只檢測(cè) SHR 大鼠）；免疫熒光檢測(cè)腎臟和主動(dòng)脈組織中硝基酪氨酸、Ⅰ型膠原蛋白的表達(dá)（需染DAPI） （免疫熒光只檢測(cè) SHR 大鼠）；取肝臟組織進(jìn)行 HE 染色觀察（HE只檢測(cè) Wistar大鼠）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
1、 血壓測(cè)定（6組，每組6只，試驗(yàn)期間的30天每5天固定時(shí)間測(cè)定大鼠給藥前和給藥后2、4、6、8、10h的血壓）
2、 心率測(cè)定（6 組，每組6只，試驗(yàn)期間的30天每5天固定時(shí)間測(cè)定大鼠給藥前和給藥后2、4、6、8、10h的心率）
3、 樣本采集（6組，每組6只）
4、 ELISA 檢測(cè)（6組，每組3只，血漿樣本3個(gè)指標(biāo)：Ang Ⅱ、緩激肽、NO）
5、 試劑盒檢測(cè)（6組，每組3只，血清樣本6個(gè)指標(biāo)：T-CHO、TG、HDL-G、LDL-G、血清中鉀、血清中鈉）
6、WB檢測(cè)（SHR 4組，每組3只，大動(dòng)脈和腸系膜動(dòng)脈混合樣品，3個(gè)指標(biāo)：
ICAM-1、VCAM-1、eNOS）。

7、 免疫熒光（SHR4 組，每組3只，腎臟和主動(dòng)脈組織， 2個(gè)指標(biāo)：硝基酪氨酸、Ⅰ型膠原蛋白）
8、 HE 染色（Wistar2 組，每組 3 只，肝臟組織）。

 

實(shí)驗(yàn) 2： 血管功能的研究
實(shí)驗(yàn)材料： 實(shí)驗(yàn)1采集的腸系膜動(dòng)脈樣本18例、苯腎上腺素PE、乙酰甲膽堿MCh、L-NAME

分離小的腸系膜動(dòng)脈（直徑150~250μm，長(zhǎng)度~2mm），清理動(dòng)脈周?chē)�的脂肪和結(jié)締組織。隨后裝在 2 個(gè)40μm的鎢絲上，再裝入微血管張力測(cè)定系統(tǒng)（wiremyograph）記錄收縮張力。在零張力下，血管在 HEPES-PSS 緩沖液穩(wěn)定 30min。穩(wěn)定后，需要預(yù)處理以決定最佳張力。通過(guò)逐漸增加直徑以標(biāo)準(zhǔn)化血管， 決定最佳的靜置壓力設(shè)置至0.8*100周長(zhǎng)（內(nèi)部周長(zhǎng)等同于 100mmHg）。平衡30min后，將腸系膜動(dòng)脈浸于單一劑量 PE（苯腎上腺素）液兩次（PE：10 µmol/L），
之后浸于單一劑量的乙酰甲膽堿（ MCh： 3µmol/L）以評(píng)估內(nèi)皮和平滑肌的功能完整性。繪制PE累計(jì)濃度的濃度效應(yīng)曲線（10^-8 至10^-4 mol/L）以確定收縮響應(yīng)（濃度梯度涉及到摸索）。為評(píng)估內(nèi)皮依賴型疏松性 繪制MCh的累計(jì)濃度響應(yīng)曲線（10^-10至10^-4 mol/L）。為研究NO在內(nèi)皮依賴性舒張中的作用，用存在
或不存在 NOS（一氧化氮合酶）抑制劑L-NAME分別處理血管。處理后，血管用 PE 預(yù)收縮（最大 80%）直至平穩(wěn)。MCh的累計(jì)劑量加入至水浴中以評(píng)估血管張力（通過(guò)前面繪制的MCh標(biāo)準(zhǔn)曲線）。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，血管浸入高K⁺濃度中以保證活力。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
1、 血管功能研究（6組，每組3例，共18例）

 

實(shí)驗(yàn)3：內(nèi)皮功能的研究
實(shí)驗(yàn)材料：Wistar大鼠、樣品、苯丙腎上腺素、乙酰膽堿、NOC-5、L-NAME、
TEA、INDO、HOE140
實(shí)驗(yàn)分組：實(shí)驗(yàn)分2組，每組3例。
1） 主動(dòng)脈
2） 主動(dòng)脈去內(nèi)皮
實(shí)驗(yàn)步驟：
    取6只正常Wistar大鼠麻醉后，分離出大鼠的胸部主動(dòng)脈。除去血管的脂
肪組織后，將主動(dòng)脈切割成長(zhǎng)度為2~3mm的主動(dòng)脈環(huán)。
    制備好的胸部主動(dòng)脈環(huán)附于微觀組織器官浴（MTOB-1, LAB Support, Osaka,
Japan）中。該水浴液為臺(tái)氏液（10 mmol/L NaHCO2, 5.0 mmol/L glucose, 158.3
mmol/L NaCl, 4.0 mmol/L KCl, 2.0 mmol/L CaCl2· 2H2O, 1.0 mmol/L MgCl2· 6H2O, 0.42 mmol/L NaH2PO4），水溫 37℃，采用 95% O2 和 5% CO2 氣體冒泡。主動(dòng)脈環(huán)被加載2g初始張力。待血管穩(wěn)定后，用最終濃度為1 μmol/L 的苯腎上腺素（phenylephrine， PE）收縮血管。在PE處理收縮充分后，溶于臺(tái)氏液的受試物樣品（樣品濃度 10^-5、10^-7、10^-9 mol/L）逐步加入水浴中， 血管舒張度采用張力的改變來(lái)測(cè)定。

為了測(cè)試血管數(shù)舒張度是否基于內(nèi)皮，通過(guò)將吸管（rubbing pipette tips）移到主動(dòng)脈環(huán)內(nèi)部，物理去除了內(nèi)皮，同時(shí)基于之前方法測(cè)定血管張力。內(nèi)皮切除后的血管采用最終濃度為10^-6 mol/L的乙酰膽堿（acetylcholine，Ach，陽(yáng)性對(duì)照） 測(cè)定血管舒張的消失。對(duì)于去除內(nèi)皮的動(dòng)脈，血管舒張活性的保留采用10^-6mol/L 的 3-(aminopropyl)-1-hydroxy-3-isopropyl-2-oxo-1-triazene (NOC-5)（NO 供體） 測(cè)定血管舒張性。最后，在加PE前的10min，添加內(nèi)皮血管舒張物產(chǎn)物的拮抗劑或者抑制劑（L-NAME、TEA、INDO、HOE140）。在同樣的條件下評(píng)估血管舒張響應(yīng)，對(duì)比樣品組。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果：
1、 主動(dòng)脈分離（6只）
2、 內(nèi)皮功能研究（6例）

 

其他要求:1.交貨時(shí)間:成交通知書(shū)發(fā)出之日起10個(gè)工作日內(nèi)簽訂合同,合同簽訂后6個(gè)月內(nèi)完成實(shí)驗(yàn)并向用戶提供電子版（采用WORD或者PDF版本）的實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告書(shū)，報(bào)告書(shū)要求有詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)流程、清晰的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)圖表；2.付款方式:合同簽訂后付合同總額的60%作為啟動(dòng)資金，余款于實(shí)驗(yàn)完成并交付用戶驗(yàn)收后一個(gè)月內(nèi)完成支付。

1項(xiàng)

130000

130000

福建農(nóng)林大學(xué)